外泌體的多樣本自動(dòng)分離與純化，現(xiàn)在它真的來了?。?！
外泌體（exosomes）是一種由細(xì)胞分泌的、粒徑分布在30-200 nm之間的細(xì)胞外囊泡，其表面與內(nèi)部攜帶大量蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸等生物分子。作為細(xì)胞間物質(zhì)與信號通訊的重要媒介，外泌體在免疫應(yīng)答、病毒感染、腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病等生命活動(dòng)中起著重要的作用。由于外泌體攜帶的生物分子可直接反映來源細(xì)胞的生理與病理狀態(tài)，對這些生物分子的測定可使研究者更深入地了解體內(nèi)的生理或病理情況，并有望作為腫瘤或其他疾病的診斷標(biāo)志物。
雖然外泌體的檢測存在上述優(yōu)勢，但目前的外泌體提取方法仍為實(shí)驗(yàn)人員手工操作，由于外泌體提取的效果直接與實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)相關(guān)，導(dǎo)致提取的重復(fù)性與穩(wěn)定性存在一定欠缺。且現(xiàn)有方法大多存在步驟繁瑣耗時(shí)長、人員上手難度大等劣勢。如何準(zhǔn)確高效地提取外泌體，使外泌體的制備流程標(biāo)準(zhǔn)化、穩(wěn)定化，一直是研究者們關(guān)注的熱點(diǎn)。
現(xiàn)在，外泌體的多樣本自動(dòng)分離與純化，它終于來了！由上海邁景納米科技有限公司自主研發(fā)的MagExo?外泌體提取試劑盒，通過優(yōu)化的試劑體系與磁珠載體，可同基于磁珠的核酸自動(dòng)化提取一樣，實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定、標(biāo)準(zhǔn)化外泌體的多樣本自動(dòng)分離與純化。從已有的核酸自動(dòng)化提取可見，自動(dòng)化的樣本處理不僅能降低實(shí)驗(yàn)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度，還可減少提取過程中的人為實(shí)驗(yàn)誤差、提高處理效率與通量，高通量的儀器大幅節(jié)省了時(shí)間成本與人力成本，增加了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性與數(shù)據(jù)的可靠性?，F(xiàn)在，在外泌體的提取上這些也都可以實(shí)現(xiàn)，以下是MagExo?外泌體提取試劑盒的簡要提取流程：
圖2 MagExo?外泌體提取試劑盒的提取流程示意圖
外泌體在反應(yīng)液中通過磁珠的表面基團(tuán)以及磁珠與其他雜質(zhì)的相對作用力被捕獲后，再通過洗脫液從磁珠表面被釋放，該流程與磁珠提取核酸的流程基本一致，可方便地嫁接到市售核酸提取儀中，通過簡單的程序修改，實(shí)現(xiàn)外泌體的自動(dòng)化提取。
圖3 磁珠法核酸提取示意圖
以下是基于市面常見的32通量半自動(dòng)核酸提取儀設(shè)計(jì)的外泌體自動(dòng)化提取方案，僅供參考，具體可根據(jù)實(shí)驗(yàn)自行設(shè)計(jì)。（全自動(dòng)核酸提取儀更佳，儀器包括移液部分，只需放入試劑樣本即可）
圖4 深孔板板位內(nèi)試劑與樣本示意圖
依上圖，在96孔深孔板中依次加入試劑和樣本。上機(jī)前，設(shè)置好程序，包括孵育與洗脫。第一遍洗脫完畢后，使用排槍將2/8列Elution Buffer移至3/9列，設(shè)置新的程序進(jìn)行二次純化（單塊深孔板最多可做三次純化）。目前市售的核酸提取儀溫控都是加熱處理系統(tǒng)，我們在這里可考慮冰袋或冰塊對提取過程做溫控處理，使整個(gè)提取在低溫條件下進(jìn)行。
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參考文獻(xiàn)：
[1] S. Wang, A. Khan, R. Huang, et al., Biosens. Bioelectron. 2020, 154, 112056.
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